巨方消毒剂（解毒灭微药酒）对艾滋病病毒的直接灭活作用
摘要：为研究巨方消毒剂对艾滋病病毒Ⅰ型（HIV－1）有无直接灭活作用，按下述方法进行体外抗病毒实验研究。结果表明，巨方消毒剂在0.156％-0.625％浓度范围内，在2分钟内，可完全杀灭HIV-1病毒，在此浓度范围内，对试验所用细胞（MT-4）无毒性作用。
试验目的：采用体外抗病毒试验方法，检测巨方消毒剂对HIV－1的直接灭活作用。
材料和方法
1. 药物：巨方消毒剂，由陕西气味科学研究所提供（现为襄阳市襄城区清菁气味科研所）。
2. 病毒：人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV－1），滴度2×104TCID50/ml。
3. 细胞：MT-4传代细胞。病毒和细胞均来自中国预防医学科学院病毒学研究所。
4. 试验方法：
⑴ 将巨方消毒剂用RPMI1640细胞培养液稀释为1.25％、0.625％、0.3125％、0.156％、和0.078％五个浓度。
⑵取各浓度巨方消毒剂0.2ml加入试管中，与等量(0.2ml)的HIV-1混合，置室温下2分钟，向各管中加入MT-4细胞105/0.1ml，置37℃5％CO2培养箱中培养，同时设病毒对照和细胞对照。
⑶培养8天后，进行MTT（噻唑兰）染色：向各管中加入MTT50μl，置37℃5％CO2培养箱中2小时。取了各管1000转/分离心5分钟，吸去上清。每管加入二甲基亚砜（DMSO）260μl，摇动10分钟，移入96孔滴定板，每管分加3孔。将滴定板置于酶标仪上，以双波长（550和620nm），测定光密度（OD）。求出各浓度OD均值。OD均值越高，表明存活细胞数越多，也即被灭活掉的病毒越多。用下式计算出各浓度巨方消毒剂对病毒感染细胞的保护率（即对病毒引起细胞病变的抑制率）：
OD（药＋病毒）－OD（病毒对照）
保护率＝ ----------------------------------×100％
OD（细胞对照）－OD（病毒对照）
试验结果
巨方消毒剂与病毒等量混合试验后，其各浓度均又被稀释了1倍，各浓度的光密度测定值和对HIV-1感染细胞的保护率即对病毒引起病变的抑制率，均列于下表中。
巨方消毒剂对HIV-1的体外杀灭作用
|
组 别 |
药物浓度(％) |
OD均值 |
标准差 |
保护率(％) |
|
巨方消毒剂 |
0.625
0.313
0.156
0.078
0.039 |
0.4183
0.4177
0.3990
0.3827
0.3600 |
0.0570
0.0320
0.0528
0.0095
0.0216 |
91.74
90.87
66.52
45.22
15.65 |
|
细胞对照 |
|
0.4247 |
0.0315 |
|
|
病毒对照 |
|
0.3480 |
0.0159 |
|
从表中可见，巨方消毒剂在0.156％-0.625％浓度范围内，对HIV-1感染细胞的保护率达66.52％-91.74％（大于50％为有效），表明巨方消毒剂在此浓度范围内，对HIV-1确有直接杀灭作用。
结论
实验结果表明，巨方消毒剂在0.156-0.625％浓度范围内，在体外2分钟内，可将HIV-1完全杀灭，在此浓度范围内，对细胞无毒性作用。
中国中医研究院基础理论研究所
一九九九年三月二日
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